赭曲霉毒素Ａ总量ELISA定量检测试剂盒

 联系人程小姐  传真： QQ：--- 

赭曲霉毒素Ａ总量ELISA定量检测试剂盒

赭曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉，青霉和赭曲霉）的有毒的代谢产物，这些真菌可能产生的赭曲霉毒素Ａ是一种肾毒素，具有致癌性。经常在人类食品和动物饲料中被检测到，主要存在于谷物中，日常用品中也经常含有。赭曲霉毒素会导致人的巴尔干半岛肾病变（ＢＥＮ）肾系统的瘤病变。对于动物，它会造成猪的肾功能损伤，会造成鸡和火鸡生长缓慢，饲料转化率低，肾病甚至死亡，减少蛋产量和蛋壳质量。
赭曲霉毒素Ａ总量试剂盒是利用竞争酶联免疫定量检测谷物，咖啡或动物饲料中含有的其他物质中所含的赭曲霉毒素Ａ总量。
原理
赭曲霉毒素Ａ总量试剂盒的工作原理是酶联免疫吸附分析法。一种赭曲霉毒素的特异性抗体包被在聚苯乙烯酶标板的小孔中，用70%的甲醇将样品中的赭曲霉毒素萃取后，将含有赭曲霉毒素的萃取液或标准品和过氧化物酶标记赭曲霉毒素加入到小孔中，此时过氧化物酶标记赭曲霉毒素和样品、标准品中游离的赭曲霉毒素竞争性地与包被在板上的抗体结合。在室温下温育清洗后，加入底物溶液，室温孵育一段时间，发生蓝色反应。加入停止液，终止颜色反应，蓝色变成黄色。用酶标仪在450nm处测定光密度值（OD），样品中赭曲霉毒素Ａ总量的浓度与OD值成反比关系。

试剂盒中所包含的试剂：
1．酶标板1块：包括12条，每条含有8个小孔，每个孔中均包被有鼠抗赭曲霉毒素的单克隆抗体．
2．稀释板1块：没有包被的12条8孔板。
3．6瓶赭曲霉毒素Ａ标准品浓度分别为：0, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 ng/ml（ppb），每瓶1.5 ml．
4．酶标记物（过氧化物酶标记的赭曲霉毒素Ａ）：25 ml。
5．底物溶液（TMB）：15 ml。
6．停止溶液(0.5 M H2SO4)：15 ml。
需要的其它试剂和设备（试剂盒没有提供）：
粉碎机：能将样品磨至速溶咖啡颗粒大小。
萃取容器：至少125ml。
天平：20克以上的称量范围。
100ml量筒。
每个样品70ml试剂级甲醇。30ml去离子水或蒸馏水。
滤纸：Whatman 1型或同类型滤纸。
过滤漏斗。
l。ml和200m移液器和吸头：100
计时器。
洗瓶。
吸水纸。
酶标仪（450nm）。
注意事项：
为了保证测定结果的可靠性，请按照下列良好实验室操作规范（GLP）进行实验
1．在进行分析操作之前，请将所有的试剂回温到室温(19-27°C)。
2．使用前，试剂储存在2 - 8°C，不要冰冻。
3．未用完的试剂不要倒回原瓶中，按照实验所需的量取用试剂。
4．实验过程中注意保证温度和反应时间。
5．所有的试剂在使用前，通过翻转摇动进行充分的混合，但不要引起泡沐的产生。
6．一旦实验开始，所有的操作步骤应该在规定的时间内完成，不要中断或者超时。
7．所有的试剂瓶操作完成后立即盖好盖，不要将不同试剂瓶的盖混用。
8．每个样品只能用自己的吸头，不能混用，防止交叉污染。
9．所有的样品和标准物必须同时使用，所有的试验条件保持一致。
10．不要将不同批次的试剂混用。
11．不要使用过期的试剂。
12．要经常的检查酶标仪和微量移液器的精度和准确度
健康和安全注意事项
1．在实验室不要吸烟、吃东西、喝水、用嘴吸移液管。
2．避免底物和停止液与皮肤和粘膜接触（可能产生刺激、灼烧和有毒危害）。如果接触了，请用大量的水进行清洗。
3．化学物品的处理必须按照良好实验室操作规范（GLP）进行。
4．赭曲霉毒素是毒性极强的物质。它们能够致癌、对基因造成不可修复的损伤。吸入、吞食和皮肤接触，赭曲霉毒素均会致毒。所以，试验人员必须穿防护服。
样品的制备：
注意：样品收集必须按照规定的程序进行。
1.在70ml甲醇中加入30ml蒸馏水或去离子水，配制70%的甲醇溶液。
2.将收集的样品磨碎至速溶咖啡大小的粉末（50%可以通过20目的网筛）。
3.在容器中称取20g磨碎的样品，加入100ml配置好的甲醇溶液。
4.将容器密闭好后，摇晃，或者利用搅拌机搅拌1-2分钟。
5.待稍微沉淀后，在上清液中取5-10ml，利用滤纸过滤后用于实验。